Медицинская генетика, методы генетики
Генетическая прививка
Генетическая прививка

Впервые предположение, что гены могут быть использованы для вакцинации, появилось почти полвека назад, после серии исследований, проведенных в 50-60-е гг. Эксперименты, к слову, вовсе не имевшие отношения к созданию вакцин, продемонстрировали один интересный эффект, который сегодня, впрочем, кажется очевидным.

Ученые обнаружили, что фрагменты «чужой» ДНК, имплантированные в клетки животных, способны в некотором количестве синтезировать собственные белки. Сами клетки, получившие гены другого организма, в ответ начинают вырабатывать антитела. Позднее результаты этих экспериментов подтвердились в ходе других исследований, проводившихся с целью создания новых методов лечения различных заболеваний, прежде всего наследственного характера. Имеется в виду генная терапия, первые попытки применения которой были не слишком удачными. Опыты на животных показали, что «терапевтические» гены, имплантируемые с благим намерением исправить то или иное нарушение, провоцируют иммунную реакцию и потому долго не живут. Такое наблюдение, с одной стороны, несколько разочаровало ученых, однако вскоре пришлось убедиться, что нет худа без добра. Иммунный ответ на появление чужеродных генов стали всерьез, хотя поначалу и не без некоторых сомнений, рассматривать как принцип действия вакцин нового типа.

С начала 90-х гг. научные лаборатории начали все активнее работать в этом направлении. Вводя вакцины лабораторным грызунам и приматам, ученые зафиксировали возникновение иммунной реакции, противодействующей многим различным патогенам. Более того, было доказано, что вакцины имеют некоторый эффект при терапии определенных видов рака. Хотя злокачественные опухоли вовсе не являются инфекционными заболеваниями, исследования показали, что с их развитием можно бороться за счет повышения активности иммунной системы. Позднее состоялись первые клинические испытания на человеке, которые прежде всего должны были продемонстрировать безопасность нового метода. Эксперименты состояли в том, что гены ВИЧ вносили в клетки пациентов, уже зараженных вирусом. Еще позднее аналогичные операции проделали со здоровыми людьми. Помимо генов вируса иммунодефицита им пересаживали гены гриппа, а в ходе дальнейших исследований – герпеса и гепатита B. Результаты всех тестов оказались вполне обнадеживающими: вакцины стабильно провоцировали иммунный ответ. Что касается соображений в духе «не навреди», то серьезных побочных эффектов, способных привести к неприятным последствиям, отмечено не было.

Эксперименты по созданию ДНК-вакцин преимущественно ведутся с бактериальными плазмидами – небольшими стабильными кольцевыми ДНК, которые содержатся вне хромосом. Плазмиды хороши в том плане, что сами по себе не провоцируют инфекцию. Фактически их используют только в качестве вектора – средства доставки. Чтобы вызвать необходимую иммунную реакцию, выделенные из бактерий плазмиды модифицируют, внося определенные изменения в структуру ДНК. А именно вшивают гены, которые кодируют один или несколько определенных белков-антигенов, вырабатываемых конкретной бактерией или вирусом. Также встраиваются гены, необходимые для обеспечения экспрессии (активности) всей конструкции. В то же время фрагменты ДНК, ответственные за воспроизводство и размножение инфекции, в плазмиды не переносятся. Вводится вакцина обычно либо путем инъекции, либо с помощью так называемой «генной пушки». Этот аппарат, выпуская струю сжатого гелия, пробивает клеточные мембраны микроскопическими металлическими частицами, покрытыми ДНК. Попав тем или иным способом внутрь клеток, плазмиды провоцируют синтез белков-антигенов. Их появление вакцинируемый организм воспринимает как полноценное инфицирование и реагирует обычным образом, в итоге вырабатывая иммунитет против соответствующей бактерии или вируса.

Уже первые успешные испытания, в ходе которых была продемонстрирована перспективность самой идеи создания ДНК-вакцин, привлекли немалое внимание как государственных структур, действующих в сфере здравоохранения, так и крупнейших частных компаний. Многие из них подключились на самых ранних этапах исследований, либо разработав собственные научные программы, либо заключив соглашения с академическими центрами и лабораториями. Сегодня Aventis, Merck, Pfizer и другие фармацевтические и биотехнологические гиганты рассматривают создание новых методов иммунизации как одно из приоритетных направлений работы.
Стойкость иммунитета, который вырабатывается в ответ на введение ДНК-вакцин, определяется принципиально важным обстоятельством. Поскольку антигены синтезируются внутри самого организма, а не поступают в него извне, вызывается комплексная реакция. Активизируются все типы белых кровяных телец: B-лимфоциты вырабатывают антитела, нейтрализующие антигены в жидких межклеточных тканях (гуморальный иммунный ответ), а цитотоксические Т-лимфоциты разрушают болезнетворные агенты внутри клеток (клеточный иммунный ответ).

Аналогичным образом действуют вакцины, содержащие живые аттенуированные (ослабленные) вирусы или бактерии. Однако их применение может быть связано с некоторыми рисками. Хотя вводится лишь ослабленный патоген, вероятность инфицирования и развития болезни при определенных условиях не исключена. Даже ослабленные вирусы или бактерии не являются стопроцентно безопасными, что подтверждают медицинские отчеты, описывающие отдельные случаи заболевания при вакцинации. Особенно рискуют люди с иммунной недостаточностью, такие как больные СПИДом и раковые пациенты, проходящие курсы химиотерапии. Кроме того, ослабленные живые бактерии и вирусы в некоторых случаях могут мутировать, восстанавливая весь свой патогенный потенциал. Более безопасны вакцины, которые содержат убитый патоген либо отдельный очищенный его компонент – белок или полисахарид. Однако такие препараты менее эффективны: они в основном вызывают только гуморальный иммунный ответ и, кроме того, нередко требуют проведения повторных вакцинаций.

К недостаткам обычных вакцин относится и то, что они достаточно дороги в производстве (применяются разнообразные технологии изготовления, зависящие от особенностей конкретных микробов), а также нуждаются в особых условиях хранения и транспортировки – прежде всего, постоянной низкой температуре. Два этих обстоятельства существенно осложняют возможность массового применения самых необходимых лекарств во многих не особенно благополучных странах.

ДНК-вакцины заметно превосходят по своим характеристикам обычные препараты. В целом результаты многочисленных лабораторных исследований и клинических испытаний указывают на то, что ДНК-вакцины обладают всеми положительными свойствами традиционных вакцин, при этом не имея их недостатков. Введение фрагментов ДНК бактерий или вирусов вызывает полноценную иммунную реакцию, но совершенно исключает возможность заражения, поскольку в клетки не попадают гены, необходимые для развития инфекции. ДНК-вакцины сравнительно просто синтезировать в значительных количествах, используя уже ставшую обычной рекомбинантную технологию. Причем весь производственный процесс предельно унифицирован – меняются только гены, которые включаются в плазмиду. Кроме того, поскольку вакцины способны содержать фрагменты ДНК сразу нескольких различных штаммов возбудителей, их можно использовать для противодействия целому ряду инфекций одновременно. Что было бы чрезвычайно полезно, особенно в случае, если дело касается таких изменчивых и многоликих микроорганизмов, как вирус гриппа. Наконец, ДНК-вакцины чрезвычайно устойчивы и могут, в растворе или в сухом виде, храниться при обычных условиях, выдерживая высокие и низкие температуры и разный уровень влажности.

Разумеется, столь многообещающий метод иммунизации не лишен недостатков, самый очевидный из которых вытекает из самой природы ДНК-вакцин. Поскольку вводятся гены, кодирующие белковые молекулы, вырабатывается иммунный ответ только на появление белковых компонентов вирусов и бактерий. Иначе говоря, традиционным вакцинам, в которых используются полисахариды, пока нет альтернативы. Другие потенциально слабые места ДНК-вакцин активно проверяются. Существовало опасение, что чужеродная ДНК может каким-то образом повредить ДНК человека. Другая неприятность, которую подозревали при первых испытаниях, - возникновение аутоиммунного ответа, т. е. реакции, направленной против собственных клеток. Также не исключалась вероятность развития толерантности к препарату и, как следствие, быстрого снижения эффекта от вакцинации. Хотя все эти проблемы не проявились при проведении тестов, ученые продолжают оценивать риски, связанные с применением нового метода иммунизации.

Результаты некоторых исследований позволяют предположить, что функции плазмид-векторов на самом деле не ограничиваются доставкой «инфекционных» генов. Иммунная реакция, вызываемая этими генами (точнее, соответствующими им белками) самими плазмидами дополнительно усиливается. Такой эффект, вероятно, связан с тем принципиальным обстоятельством, что в ДНК микроорганизмов, в том числе в кольцевых плазмидах, часто встречается определенный фрагмент, а именно связка цитозина (C) и гуанина (G). Эти два нуклеотидных основания намного реже соседствуют в ДНК позвоночных. Кроме того, если у позвоночных цитозин и гуанин расположены последовательно в одной цепочке двойной спирали, к ним обычно прикрепляется метиловая химическая группа. Бактерии обходятся без этого дополнения. Ученые предполагают, что клетки позвоночных воспринимают часто повторяющиеся неметилированные CG-фрагменты как сигнал опасности. В ответ активизируется так называемая «первичная» часть иммунной системы, работа которой не связана с распознаванием специфичных белков-антигенов.

Эта гипотеза лежит в основе особого направления исследований в рамках работы над ДНК-вакцинами. Несколько научных групп сегодня пытаются создать препарат, способный на короткое время активизировать иммунную систему таким образом, чтобы она немедленно и мощно реагировала на вторжение любой инфекции. Такой препарат, к примеру, обезопасил бы людей, которым предстоит дальняя поездка, особенно по неблагополучным в санитарном отношении районам. Вакцину могли бы принимать пациенты, ожидающие хирургическую операцию и желающие максимально исключить вероятность заражения и развития инфекции, очевидную при пониженной активности иммунной системы. Кроме того, возникает возможность обезопасить людей, вынужденных находиться на зараженных территориях. Последний пункт становится особенно актуальным в связи с известными событиями, напугавшими растущей угрозой применения биологического оружия.

Принцип, который разрабатывается при создании универсальной вакцины, подразумевает использование не генов, кодирующих белки-антигены микробов, а бактериальных последовательностей CG в качестве активного компонента вакцины. Идея в том, что когда иммунная система человека обнаруживает часто встречающиеся CG-фрагменты ДНК, лишенные метиловой группы, немедленно вызывается общий иммунный ответ, который защищает от инфекции. Нужно подчеркнуть, что поскольку эта реакция является неспециализированной, она направлена против многих видов бактерий одновременно, в том числе штаммов, которые не поддаются воздействию обычных вакцин.

Такое действие, как подтверждают начальные исследования, существует не только чисто теоретически. Предварительные испытания дают вдохновляющие результаты как в плане проверки препаратов на наличие неблагоприятных побочных эффектов, так и в отношении развития стойкого иммунитета. Эксперименты на мышах показали, что ДНК-вакцина такого типа предотвращает развитие сибирской язвы. Также продемонстрирована эффективность препарата при борьбе с лихорадкой Эбола и другими инфекциями, в том числе теми, которые могут быть использованы в качестве биологического оружия. Кроме того, вакцина способна защитить и от паразитов. В частности, тесты показали ее противомалярийное действие. Как отмечают ученые, синтетические препараты, содержащие CG бактерий в качестве активного компонента, прежде всего ограничивают рост и размножение патогенов на ранних стадиях развития инфекции.

О воздействии вакцины на человека и тем более о перспективах ее терапевтического применения ученые пока говорят осторожно. Первые лабораторные эксперименты с человеческими клетками оказались вполне успешными, однако полный цикл клинических испытаний еще предстоит провести. С другой стороны, особенных неприятных неожиданностей, как кажется, ожидать вряд ли следует. Многочисленные бактериальные последовательности цитозина и гуанина содержатся в любой ДНК-вакцине, в том числе в тех, которые уже были протестированы на людях. Проводились и более предметные исследования, в ходе которых оценивалось действие именно CG-фрагментов. В частности, испытания проводили специалисты компании Coley Pharmaceuticals. Правда, они использовали соединение гуанина и цитозина в соответствии с первоначальной идеей, т. е. только в качестве средства, усиливающего действие других вакцин. Пока неясно, планируют ли Coley и другие фармацевтические компании расширить исследования и взяться за разработку полнофункционального самостоятельного препарата. Вполне возможно, что планируют или даже уже делают. В том числе, не исключено, с прицелом на применение вакцины против искусственно созданных штаммов. Во всяком случая, в одном из заявлений Артур Криг (Arthur Krieg), глава научного отдела Coley, высказался в том плане, что использование CG бактерий может быть чрезвычайно эффективным способом активизации естественной иммунной системы с целью обеспечения защиты от биологического оружия различного типа.

Дмитрий Томилов

Источник: Xterra.ru

просмотров: 2621
Search All Amazon* UK* DE* FR* JP* CA* CN* IT* ES* IN* BR* MX
Search All Ebay* AU* AT* BE* CA* FR* DE* IN* IE* IT* MY* NL* PL* SG* ES* CH* UK*
(0+) Генетическая одиссея человека

366,00 руб.
End Date: 07.02 14:07
Buy It Now for only: US 366,00 руб.
Buy it now |
Генетическая психология русском Пиаже флейвелл 1967 психология Жан Пиаже, жесткий чехол

1 127,63 руб.
End Date: 21.01 20:52
Buy It Now for only: US 1 127,63 руб.
Buy it now |
Генетические катастрофы-паровой ключ-универсальный ключ + бонус

99,56 руб.
End Date: 03.02 09:40
Buy It Now for only: US 99,56 руб.
Buy it now |
Blade Runner Tyrell Corporation Genetic Replicants iron on patch (75mm x 75mm)

278,45 руб.
End Date: 27.01 22:43
Buy It Now for only: US 278,45 руб.
Buy it now |
Роковая женщина лак 9 мл

862,81 руб.
End Date: 30.01 02:38
Buy It Now for only: US 862,81 руб.
Buy it now |
Embroidered Iron on Patches Star Wars Aliens Resident Evil Bladerunner Avengers

299,87 руб.
End Date: 27.01 21:16
Buy It Now for only: US 299,87 руб.
Buy it now |
Набор из 3 формочками: хромосома, Y, ДНК | генетическая молекула медицинская наука

1 920,89 руб.
End Date: 10.02 09:19
Buy It Now for only: US 1 920,89 руб.
Buy it now |
ND3X 50 ночного видения зеленая лазерная генетические целеуказатель междугородние с кронштейнами

8 057,09 руб.
End Date: 06.02 17:22
Buy It Now for only: US 8 057,09 руб.
Buy it now |
Search Results from AllSoft: новости

Сан-Франциско ждет! Вы — Маркус, блестящий хакер, объединяетесь с DedSec, чтобы противостоять ctOS 2.0, системе глобального контроля. Сокрушите ее, это будет взлом века!
Первым покупателям — скидка 250 рублей! Успей купить первым! 


подробнее»
181528

PrintStore Pro — программа для учета расходных материалов и оборудования. Просчитывает запас каждого картриджа в каждом принтере и помогает сформировать заказ на следующий период. Поддерживает учет перезаправок. Учитывает при всех операциях совместимость принтеров и картриджей. Хранит историю всех действий с картриджами и принтерами, позволяет создавать множество отчетов.


подробнее»
123795

Fax Voip T38 Fax & Voice — факс и автоответчик для вашей SIP/H.323/ISDN сети. Виртуальные голосовые факс модемы. Поддержка T.38, Fax поверх G.711 и CAPI факс. Одновременные SIP регистрации, маршрутизация вызовов, цветные факсы. Совместимость со стандартными факс программами. Fax Voip принтер, Консоль Fax Voip для управления факсами. Сохранение входящих факсов в TIFF/PDF/SFF файлы. Маршрутизация входящих факсов: E-mail, Сохранить в папке, Печать. Факс по запросу. Отправка факса через e-mail (Почта-на-факс) и получение факсов на e-mail (Факс-на-почту).


подробнее»
139103

Fax Voip T38 Fax & Voice — факс и автоответчик для вашей SIP/H.323/ISDN сети. Виртуальные голосовые факс модемы. Поддержка T.38, Fax поверх G.711 и CAPI факс. Одновременные SIP регистрации, маршрутизация вызовов, цветные факсы. Совместимость со стандартными факс программами. Fax Voip принтер, Консоль Fax Voip для управления факсами. Сохранение входящих факсов в TIFF/PDF/SFF файлы. Маршрутизация входящих факсов: E-mail, Сохранить в папке, Печать. Факс по запросу. Отправка факса через e-mail (Почта-на-факс) и получение факсов на e-mail (Факс-на-почту).


подробнее»
141754

Retouch Pilot — программа для удаления изъянов с фотографий, таких как царапины, мелкие пятна и другие мелкие дефекты, существующие на фото или полученные при сканировании. Вы можете удалять целые объекты, попавшие случайно в кадр, а также инструментом пластика изменять форму и пропорции. Программа позволяет ретушировать изъяны кожи - пятнышки, морщинки и др..


подробнее»
26516

R-Studio — эффективное программное обеспечение, позволяющее восстанавливать данные с жестких дисков, CD, DVD, дискет, USB дисков, ZIP дисков и устройств флеш-памяти.


подробнее»
88115

Сборка электронных каталогов автозапчастей включает в себя грузовые автомобили Европы и Китая. В сборку включена программа Tecdoc, позволяющая подобрать не оригинальные запчасти.


подробнее»
183206

Sound Pilot озвучивает клавиатуру. Каждое прикосновение к клавиатуре рождает звук, который разнообразит процесс набора текста, развлекает и снижает утомляемость.


подробнее»
78205
Search Results from «Озон» Медицинская литература
 
Л. Хенч , Д. Джонс Биоматериалы, искусственные органы и инжиниринг тканей Biomaterials, Artificial Organs and Tissue Engineering
Биоматериалы, искусственные органы и инжиниринг тканей
Данная книга рассказывает о разработках, проводимых на стыке многих научных дисциплин, направленных на создание специализированных биоматериалов, устройств, искусственных органов, выращивание человеческих клеток in vitro в качестве конструктов тканей....

Цена:
335 руб

С. И. Козлова, Н. С. Демикова Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование
Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование
В книге содержится описание около 500 наиболее распространенных наследственных синдромов, проиллюстрированных фотографиями больных. Приводятся минимальные диагностические признаки, клиническая характеристика, тип наследования, дифференциальная диагностика, сведения по молекулярной генетике синдромов. Описана методика медико-генетического консультирования и современные представления об эффективности этого вида помощи семьям с наследственной патологией.
Третье издание книги существенно переработано и дополнено.
Книга предназначена для генетиков, педиатров, акушеров, невропатологов и врачей других специальностей....

Цена:
849 руб

Джон Терни Я - суперорганизм! Человек и его микробиом
Я - суперорганизм! Человек и его микробиом
В каждом из нас живет множество бактерий и вирусов - во рту, на коже, в кишечнике. Они помогают переваривать пищу и усваивать лекарства, влияют на нашу гормональную и иммунную системы и более того - даже на мозг! Все это сообщество микроорганизмов ученые назвали микробиомом.
Джон Тёрни рассказывает о самых последних исследованиях микробиома, о его возникновении, росте и роли в развитии самых разных болезней (аллергии, диабета, желудочно-кишечных расстройств, рака и шизофрении). Прочтя эту книгу, вы, несомненно, по-новому ощутите свой организм, свое тело; по-новому посмотрите на себя как на личность....

Цена:
446 руб

Айдан Бен-Барак Почему мы до сих пор живы? Путеводитель по иммунной системе Why Aren't We Dead Yet?
Почему мы до сих пор живы? Путеводитель по иммунной системе
Известно, что везде и всюду нас подстерегает несметное множество невидимых глазу бактерий и вирусов, только и ждущих удобного случая, чтобы проникнуть внутрь нашего организма. Большая часть из них - возбудители опасных и тяжких болезней. Но удивительное дело - мы до сих пор живы! А спасает нас от всей этой нечисти наша иммунная система. О том, как она устроена, что в нее входит и как она работает, что такое вакцины и иммунитет, как бороться с аллергией и что придет на смену антибиотикам, рассказывает в своей увлекательной книге микробиолог и историк науки Айдан Бен-Барак....

Цена:
402 руб

Ричард Докинз Эгоистичный ген The Selfish Gene
Эгоистичный ген
Мы созданы нашими генами. Мы, животные, существуем, чтобы сохранить их, и служим лишь машинами, обеспечивающими их выживание. Мир эгоистичного гена - это мир жестокой конкуренции, безжалостной эксплуатации и обмана. Ну а как же акты альтруизма, наблюдаемые в природе: пчелы, совершающие самоубийство, когда они жалят врага, чтобы защитить улей, или птицы, рискующие жизнью, чтобы предупредить стаю о приближении ястреба? Противоречит ли это фундаментальному закону об эгоистичности гена? Ни в коем случае! Докинз показывает, что эгоистичный ген - это еще и хитрый ген. И он лелеет надежду, что вид Homo sapiens - единственный на всем земном шаре - в силах взбунтоваться против намерений эгоистичного гена.
Перевод сверен по юбилейному английскому изданию 2006 года....

Цена:
496 руб

Основы генетики человека
Основы генетики человека
Генетика человека - одна из наиболее трудных и вместе с тем ответственных областей генетики. Вопросы практического характера преобладают в ней над теоретическими. Однако ответственное разрешение медицинских проблем невозможно без углубленного и детального знания основ генетической теории. Книга К.Штерна дает прежде всего обстоятельное изложение этих основ. Изложение ведется в общедоступной форме, постепенно подводя читателя к пониманию более специальных и сложных разделов, которые требуют некоторого умственного напряжения.
Книга рассчитана прежде всего на врачей, которые занимаются медициной не только практически, но и научно. Она сослужит службу и как руководство и как справочник профессорам и преподавателям медицинских факультетов и институтов, а также аспирантам, готовящимся для научной и преподавательской работы.
Приложенные к книге дополнения дают читателю представление о достижениях антропогенетики за пятилетие....

Цена:
639 руб

Под редакцией В. С. Баранова Генетический паспорт - основа индивидуальной и предикативной медицины
Генетический паспорт - основа индивидуальной и предикативной медицины
В доступной форме в книге изложены основные события, произошедшие в медицинской генетике и в молекулярной медицине после расшифровки генома человека. Даны современные представления о структуре генома, генетическом полиморфизме, генах-кандидатах, ассоциированных с такими частыми заболеваниями, как бронхиальная астма, остеопороз, нейродегенеративные болезни, диабет, с различной тяжелой акушерской патологией.

Книга рассчитана на практикующих врачей, студентов мединститутов и биофаков университетов и, конечно, на специалистов по медицинской генетике. Широкому кругу читателей книга даст представление о генетическом тестировании, вариантах генетического паспорта, состоянии и перспективах новых направлений предиктивной медицины: нутригеномике, спортивной генетике, генетике старения и фармакогенетике....

Цена:
818 руб

М. В. Донова Биоконверсия стероидных соединений актинобактериями
Биоконверсия стероидных соединений актинобактериями
В настоящей монографии впервые проанализированы и обобщены новейшие сведения о биоконверсии стероидных соединений актинобактериями, - бактериями, обладающими широким и уникальным биокаталитическим потенциалом. Рассмотрены ключевые реакции струк-турной функционализации стероидов, осуществляемые актинобактериями, свойства и особенности ферментных систем, ответственных за трансформацию стероидов. Большое внимание уделено биотехнологическим аспектам трансформации стероидов актинобактериями и применению биопроцессов для производства фармацевтических субстанций стероидов различных классов.

Книга адресована специалистам, преподавателям вузов, аспирантам, студентам, изучающим различные процессы микробиологической трансформации органических соединений....

Цена:
682 руб

Да сгинет смерть! Победа над старением и продление человеческой жизни No More Dying: The Conquest of Aging and the Extension of Human Life
Да сгинет смерть! Победа над старением и продление человеческой жизни
Популярный рассказ американских авторов об успехах и перспективах проблемы увеличения продолжительности жизни человека.
Геронтологи, врачи и многочисленные читатели почерпнут из книги любопытные сведения о теориях и экспериментах, цель которых - отодвинуть процесс старения и приблизить появление на Земле Человека долгоживущего....

Цена:
276 руб

С. В. Разин, А. А. Быстрицкий Хроматин: упакованный геном
Хроматин: упакованный геном
В учебном издании впервые всесторонне рассмотрены структурные и функциональные особенности эукариотического генома, главное - упаковка ДНК в хроматин. Подробно описан гистоновый код и его влияние на экспрессию генов. Изложение основано на новейших данных и современной концепции об организации генома в хромосомные территории.

Для студентов и аспирантов биологических специальностей, а также специалистов в области молекулярной биологии эукариот....

Цена:
405 руб

2007 Copyright © GenDNA.ru Мобильная Версия v.2015 | PeterLife и компания
Пользовательское соглашение использование материалов сайта разрешено с активной ссылкой на сайт. Партнёрская программа.
Яндекс.Метрика Яндекс цитирования